WEKO3
アイテム
{"_buckets": {"deposit": "62ab9ac7-8587-4d2e-aa1c-456274055c6d"}, "_deposit": {"created_by": 3, "id": "353", "owners": [3], "pid": {"revision_id": 0, "type": "depid", "value": "353"}, "status": "published"}, "_oai": {"id": "oai:nodai.repo.nii.ac.jp:00000353", "sets": ["88"]}, "author_link": ["1875", "1873", "1872", "1876", "1874", "1878", "1877", "1879"], "item_1_biblio_info_12": {"attribute_name": "書誌情報", "attribute_value_mlt": [{"bibliographicIssueNumber": "4", "bibliographicPageEnd": "326", "bibliographicPageStart": "322", "bibliographicVolumeNumber": "53", "bibliographic_titles": [{}]}]}, "item_1_description_10": {"attribute_name": "抄録(日)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "低分子量Gタンパク質Rab5は細胞膜から初期エンドソームへの小胞輸送や初期エンドソーム同士の融合に関与する因子であることが知られている。過去の報告では,GTPγSなどの加水分解耐性GTPアナログを使用しFar-western blottingを行うことによってRab5結合因子が検出されている。しかしながら,この方法ではNEおよびNS反応の際に多量の加水分解耐性GTPアナログが必要であり,実験時間やコストが非常にかかる。本論文ではFar-western blottingのプローブとして常時活性型変異体Rab5Q79Lを用いることによって,NE反応とNS反応が必要なく加水分解耐性GTPアナログを使用しない簡便且つ実験コストが低い方法について記述する。この方法を評価するため,既知のRab5結合因子であるEEA1とRab5が結合するか否か検証したところ結合が確認された。さらにLC MS/MSによってRab5結合因子の同定を試みたところactin betaが同定された。我々の方法では実験時間が3-4時間程短縮され,実験コストは90-95%削減された。我々はこの方法がRab5による細胞内小胞輸送における重要な知見をもたらすものと考える。", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_11": {"attribute_name": "抄録(英)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "The small GTP binding-protein Rab5 is known to be involved both in the vesicle-mediated transport from the plasma membrane to the early endosomes, and in the homotypic early endosome fusion. Previous reports showed that Rab5-binding proteins can be detected by using Far-western blotting in the presence of non-hydrolyzable GTP analogs such as GTPγS. However, this method requires significant quantities of non-hydrolyzable GTP analog and is thus time-consuming and expensive for the nucleotide exchange (NE) and nucleotide stabilization (NS) reactions. In this report we describe a faster and more cost-effective method that does not use non-hydrolyzable GTP analogs but rather, a constitutively active Rab5 mutant Q79L as a Far-western blotting probe. To validate this method, the binding of the previously characterized Rab5-binding protein EEA-1 was confirmed and actin beta was identified as a Rab5-binding protein by LC MS/MS. Our protocol can reduce the experimental time (by 3-4 h) and the cost (by 90-95%) for the experiment. We expect this method to provide fundamental insights into the molecular mechanism of intracellular transport by Rab5.", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_13": {"attribute_name": "レポート・講演番号", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "E", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_15": {"attribute_name": "表示順", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "5", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_16": {"attribute_name": "アクセション番号", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "KJ00005352363", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_8": {"attribute_name": "記事種別(日)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "論文", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_description_9": {"attribute_name": "記事種別(英)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_description": "Article", "subitem_description_type": "Other"}]}, "item_1_source_id_1": {"attribute_name": "雑誌書誌ID", "attribute_value_mlt": [{"subitem_source_identifier": "AN00164184", "subitem_source_identifier_type": "NCID"}]}, "item_1_text_6": {"attribute_name": "著者所属(日)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_text_value": "東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 "}, {"subitem_text_value": " 東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 "}, {"subitem_text_value": " 東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 "}, {"subitem_text_value": " 東京農業大学大学院農学研究科農芸化学"}]}, "item_1_text_7": {"attribute_name": "著者所属(英)", "attribute_value_mlt": [{"subitem_text_language": "en", "subitem_text_value": "Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture "}, {"subitem_text_language": "en", "subitem_text_value": " Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture "}, {"subitem_text_language": "en", "subitem_text_value": " Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture "}, {"subitem_text_language": "en", "subitem_text_value": " Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture"}]}, "item_1_title_3": {"attribute_name": "論文名よみ", "attribute_value_mlt": [{"subitem_title": "RABケツゴウインシドウテイノタメノジンソクカツカンベンナFAR-WESTERN BLOTTING"}]}, "item_creator": {"attribute_name": "著者", "attribute_type": "creator", "attribute_value_mlt": [{"creatorNames": [{"creatorName": "萩原, 真"}, {"creatorName": "ハギワラ, マコト", "creatorNameLang": "ja-Kana"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1872", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "小林 謙一"}, {"creatorName": "コバヤシ, ケンイチ", "creatorNameLang": "ja-Kana"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1873", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "田所 忠弘"}, {"creatorName": "タドコロ, タダヒロ", "creatorNameLang": "ja-Kana"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1874", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "山本 祐司"}, {"creatorName": "ヤマモト, ユウジ", "creatorNameLang": "ja-Kana"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1875", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "HAGIWARA, Makoto", "creatorNameLang": "en"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1876", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "KOBAYASHI Ken-Ichi", "creatorNameLang": "en"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1877", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "TADOKORO Tadahiro", "creatorNameLang": "en"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1878", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}, {"creatorNames": [{"creatorName": "YAMAMOTO Yuji", "creatorNameLang": "en"}], "nameIdentifiers": [{"nameIdentifier": "1879", "nameIdentifierScheme": "WEKO"}]}]}, "item_files": {"attribute_name": "ファイル情報", "attribute_type": "file", "attribute_value_mlt": [{"accessrole": "open_date", "date": [{"dateType": "Available", "dateValue": "2016-04-20"}], "displaytype": "detail", "download_preview_message": "", "file_order": 0, "filename": "KJ00005352363.pdf", "filesize": [{"value": "214.4 kB"}], "format": "application/pdf", "future_date_message": "", "is_thumbnail": false, "licensetype": "license_free", "mimetype": "application/pdf", "size": 214400.0, "url": {"label": "KJ00005352363.pdf", "url": "https://nodai.repo.nii.ac.jp/record/353/files/KJ00005352363.pdf"}, "version_id": "98b0a053-8ff0-4bb5-88f5-03e3f9070636"}]}, "item_keyword": {"attribute_name": "キーワード", "attribute_value_mlt": [{"subitem_subject": "Rab5 ", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " エンドサイトーシス ", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " GTPγS ", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " ファーウェスタンブロッティング ", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " オーバーレイアッセイ ", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " 界面活性剤難溶性画分", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": "Rab5 ", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " endocytosis ", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " GTPγS ", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " Far-western blotting ", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " overlay assay ", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}, {"subitem_subject": " Detergent insoluble fraction", "subitem_subject_language": "en", "subitem_subject_scheme": "Other"}]}, "item_language": {"attribute_name": "言語", "attribute_value_mlt": [{"subitem_language": "eng"}]}, "item_resource_type": {"attribute_name": "資源タイプ", "attribute_value_mlt": [{"resourcetype": "departmental bulletin paper", "resourceuri": "http://purl.org/coar/resource_type/c_6501"}]}, "item_title": "Rab5結合因子同定のための迅速且つ簡便なFar-western blotting", "item_titles": {"attribute_name": "タイトル", "attribute_value_mlt": [{"subitem_title": "Rab5結合因子同定のための迅速且つ簡便なFar-western blotting"}, {"subitem_title": "Faster and More Convenient Far-western Blotting for Identifying Rab5-binding Proteins", "subitem_title_language": "en"}]}, "item_type_id": "1", "owner": "3", "path": ["88"], "permalink_uri": "https://nodai.repo.nii.ac.jp/records/353", "pubdate": {"attribute_name": "公開日", "attribute_value": "2009-03-16"}, "publish_date": "2009-03-16", "publish_status": "0", "recid": "353", "relation": {}, "relation_version_is_last": true, "title": ["Rab5結合因子同定のための迅速且つ簡便なFar-western blotting"], "weko_shared_id": -1}
Rab5結合因子同定のための迅速且つ簡便なFar-western blotting
https://nodai.repo.nii.ac.jp/records/353
https://nodai.repo.nii.ac.jp/records/353c77ad8ea-5f8c-430e-ac62-c6a74d40099a
名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
---|---|---|
KJ00005352363.pdf (214.4 kB)
|
|
Item type | [ELS]紀要論文 / Departmental Bulletin Paper(1) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
公開日 | 2009-03-16 | |||||
タイトル | ||||||
タイトル | Rab5結合因子同定のための迅速且つ簡便なFar-western blotting | |||||
タイトル | ||||||
言語 | en | |||||
タイトル | Faster and More Convenient Far-western Blotting for Identifying Rab5-binding Proteins | |||||
言語 | ||||||
言語 | eng | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | Rab5 | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | エンドサイトーシス | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | GTPγS | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | ファーウェスタンブロッティング | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | オーバーレイアッセイ | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | 界面活性剤難溶性画分 | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | Rab5 | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | endocytosis | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | GTPγS | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | Far-western blotting | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | overlay assay | |||||
キーワード | ||||||
言語 | en | |||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | Detergent insoluble fraction | |||||
資源タイプ | ||||||
資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 | |||||
資源タイプ | departmental bulletin paper | |||||
雑誌書誌ID | ||||||
収録物識別子タイプ | NCID | |||||
収録物識別子 | AN00164184 | |||||
論文名よみ | ||||||
タイトル | RABケツゴウインシドウテイノタメノジンソクカツカンベンナFAR-WESTERN BLOTTING | |||||
著者 |
萩原, 真
× 萩原, 真× 小林 謙一× 田所 忠弘× 山本 祐司× HAGIWARA, Makoto× KOBAYASHI Ken-Ichi× TADOKORO Tadahiro× YAMAMOTO Yuji |
|||||
著者所属(日) | ||||||
東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 | ||||||
著者所属(日) | ||||||
東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 | ||||||
著者所属(日) | ||||||
東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 | ||||||
著者所属(日) | ||||||
東京農業大学大学院農学研究科農芸化学 | ||||||
著者所属(英) | ||||||
en | ||||||
Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture | ||||||
著者所属(英) | ||||||
en | ||||||
Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture | ||||||
著者所属(英) | ||||||
en | ||||||
Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture | ||||||
著者所属(英) | ||||||
en | ||||||
Department of Agricultural Chemistry, Graduate School of Agriculture, Tokyo University of Agriculture | ||||||
記事種別(日) | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 論文 | |||||
記事種別(英) | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | Article | |||||
抄録(日) | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 低分子量Gタンパク質Rab5は細胞膜から初期エンドソームへの小胞輸送や初期エンドソーム同士の融合に関与する因子であることが知られている。過去の報告では,GTPγSなどの加水分解耐性GTPアナログを使用しFar-western blottingを行うことによってRab5結合因子が検出されている。しかしながら,この方法ではNEおよびNS反応の際に多量の加水分解耐性GTPアナログが必要であり,実験時間やコストが非常にかかる。本論文ではFar-western blottingのプローブとして常時活性型変異体Rab5Q79Lを用いることによって,NE反応とNS反応が必要なく加水分解耐性GTPアナログを使用しない簡便且つ実験コストが低い方法について記述する。この方法を評価するため,既知のRab5結合因子であるEEA1とRab5が結合するか否か検証したところ結合が確認された。さらにLC MS/MSによってRab5結合因子の同定を試みたところactin betaが同定された。我々の方法では実験時間が3-4時間程短縮され,実験コストは90-95%削減された。我々はこの方法がRab5による細胞内小胞輸送における重要な知見をもたらすものと考える。 | |||||
抄録(英) | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | The small GTP binding-protein Rab5 is known to be involved both in the vesicle-mediated transport from the plasma membrane to the early endosomes, and in the homotypic early endosome fusion. Previous reports showed that Rab5-binding proteins can be detected by using Far-western blotting in the presence of non-hydrolyzable GTP analogs such as GTPγS. However, this method requires significant quantities of non-hydrolyzable GTP analog and is thus time-consuming and expensive for the nucleotide exchange (NE) and nucleotide stabilization (NS) reactions. In this report we describe a faster and more cost-effective method that does not use non-hydrolyzable GTP analogs but rather, a constitutively active Rab5 mutant Q79L as a Far-western blotting probe. To validate this method, the binding of the previously characterized Rab5-binding protein EEA-1 was confirmed and actin beta was identified as a Rab5-binding protein by LC MS/MS. Our protocol can reduce the experimental time (by 3-4 h) and the cost (by 90-95%) for the experiment. We expect this method to provide fundamental insights into the molecular mechanism of intracellular transport by Rab5. | |||||
書誌情報 | 巻 53, 号 4, p. 322-326 | |||||
レポート・講演番号 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | E | |||||
表示順 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 5 | |||||
アクセション番号 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | KJ00005352363 |